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鱟試劑的試驗方法

更新時間:2022-11-01   點擊次數(shù):623次

鱟的身上流淌著一種十分珍奇的血液。這種血液是淡藍(lán)色的。這種淡藍(lán)色的血液中含銅量很高,而且一遇到細(xì)菌就會凝固。利用鱟血液的這種特殊反應(yīng),對它進行處理,可以制成一種特殊的檢驗試劑--"鱟試劑"。鱟試劑可以準(zhǔn)確、快速地檢測人體內(nèi)部組織是否因細(xì)菌感染而致病;在制藥和食品工業(yè)中,也可用它對毒素污染進行監(jiān)測。

 

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法包括兩種方法,即凝膠法和光度測定法,后者又包括濁度法和顯色基質(zhì)法。則鱟試劑可分為:凝膠法鱟試劑、動態(tài)濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態(tài)顯色法鱟試劑和終點顯色法鱟試劑。凝膠法鱟試劑通過與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來定性檢測或半定量內(nèi)毒素的方法。動態(tài)濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態(tài)顯色法鱟試劑和終點顯色法鱟試劑則都是定量檢測內(nèi)毒素的。

  

選擇合適的操作方法與順序,在鱟試劑的使用過程中尤為重要。在操作過程中要注意以下幾點:

(1) 實驗室要求潔凈、無塵埃流通;檢驗人員同時注意衛(wèi)生的保持。在整個使用操作過程中應(yīng)防止微生物的污染,例如空氣的流動,人員的口沫、汗液污染等。

(2) 鱟試劑開啟、溶解和配制時應(yīng)盡量避免將安瓿外瓶壁臟物、瓶壁碎片、砂輪鋸屑等異物混入鱟試劑中,避免鱟試劑外損。

(3) 鱟試劑中含有多種蛋白質(zhì),用力振搖會產(chǎn)生氣泡,一旦起泡難以消除,而影響檢測的準(zhǔn)確性,所以在整個操作過程中都要輕力以避免因過分震動而引起的誤差。

(4) 量取和加樣反應(yīng)物時,一定要加到試管底部接近鱟試液而不接觸鱟試液的管壁處。

(5) 凝膠的最適pH值為6~8,對于氯化鈉注射液、葡萄糖注射液(5%,10%)等注射液,不需考慮供試液的pH值,而檢查其他制劑時,尤其是一些本身緩沖能力較強或偏酸、堿的供試品,應(yīng)考慮供試品的pH值。

(6) 使用時要嚴(yán)格控制溫度和時間。當(dāng)鱟試劑一加入內(nèi)毒素及樣品混合液中時反應(yīng)已開始,并在一定的溫度范圍內(nèi),反應(yīng)溫度越高,反應(yīng)速率越大;保溫時間的增長,也會提高鱟試劑的靈敏度,增加假陽性的發(fā)生,導(dǎo)致較大誤差。因此,要注意控制溫度的變化和保溫時間。

(7) 保持實驗器具的潔凈。每次檢驗完畢,應(yīng)及時將玻璃器具充分清洗后于250℃干熱滅菌處理,待烤箱溫度升至設(shè)定的溫度后開始計時,干烤至少1h。也可用其他經(jīng)確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查的適宜方法。對于塑料、橡膠等不耐熱器材可用30%雙氧水浸泡4h,用無熱原水沖洗,70℃干燥備用。

 

鱟試劑的貯存

雖然凍干的鱟試劑在常溫條件下是相對穩(wěn)定的,但還是應(yīng)存放在2℃~8℃下,避免長時間放置在高于25℃的溫度條件下導(dǎo)致因貯藏不當(dāng)、質(zhì)量下降而引起的檢驗誤差。


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