elisa試劑盒火熱銷售中，歡迎訂購(gòu)人多巴胺 ，更多elisa試劑盒、檢測(cè)試劑盒、elisa試劑盒說(shuō)明書，咨詢！    
英文名稱：Human dopamine,DA ELISA KIT

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T        
品牌：RD/RB/IBL        
類別：ELISA試劑盒/人的ELISA檢測(cè)試劑盒      
產(chǎn)品特點(diǎn)：For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù).      
上海恒遠(yuǎn)供應(yīng)“人多巴胺 ”備有現(xiàn)貨，有需要的請(qǐng)及時(shí)垂詢   
客戶您可以通過(guò)、傳真、、網(wǎng)絡(luò)訂購(gòu)詳情咨詢?nèi)缦拢?nbsp;
電　　話：            
手　　機(jī)：            
傳　　真：86-
業(yè)　務(wù)
操作步驟
     方法一　用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:
　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。
　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。
　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O?D值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
　　方法二　用于檢測(cè)未知抗體的間接法：　　　
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。
2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW（超純水）洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
3.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。
4.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
5.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O?D值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
試劑器材
　　1.　試劑
　?。?）　包被緩沖液（PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液）:
　　　　NaCO31.59克　NaHCO3　 2.93克　　加蒸餾水至1000ml　　
    （2）　洗滌緩沖液（PH7.4 PBS）：0.15M　KH2PO4 0.2克　Na2HPO4?12H2O　2.9克　NaCl  8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸餾水至1000ml
　　（3）　稀釋液:牛血清白蛋白（BSA） 0.1克　加洗滌緩沖液至100ml　或以羊血清、兔血清等 血清與洗滌液配成5～10％使用。
　　（4）　終止液（2M H2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml。
　?。?）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:0.2M Na2HPO4（28.4克／L） 25.7ml　0.1M 檸檬酸（19.2克／L） 24.3ml　加蒸餾水50ml。
　?。?）　TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml無(wú)水乙醇） 0.5ml底物緩沖液（PH5.5） 10ml0.75％H2O2　32μl
　?。?）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg　底物緩沖液（PH5.5） 1ml　3％H2O2　2μl
　　（8）　抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。
　　（9）　正常人血清和陽(yáng)性對(duì)照血清。
　　2.　器材:
　?。?）　聚苯乙烯塑料板（簡(jiǎn)稱酶標(biāo)板）40孔或96孔，ELISA檢測(cè)儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。
　?。?）　小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
　?。?）　4℃冰箱，37℃孵育箱。
注意事項(xiàng)
　　1.　正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
　　2.　在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:
　?。?）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
　?。?） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。
　　（3）　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
　?。?）　酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

相關(guān)產(chǎn)品：

人催產(chǎn)素試劑盒 Human oxytocin,OT ELISA KIT
人妊娠相關(guān)血漿蛋白A 試劑盒 Human pregnancy associated plasma protein A,PAPP-A ELISA KIT
人抗子宮內(nèi)膜抗體試劑盒 Human Endometrium Antibody,EMAb ELISA KIT
人抗精子抗體試劑盒 Human anti-sperm antibody,AsAb ELISA KIT
人妊娠皰疹抗體試劑盒 Human Herpes Gestation,HG ELISA KIT
人胎盤生長(zhǎng)因子試劑盒 Human placenta growth factor,PLGF ELISA KIT
人凝血酶試劑盒 Human Thrombin,TM ELISA KIT
人凝血因子Ⅶ 試劑盒  Human coagulation factor Ⅶ,FⅦ ELISA KIT
人可溶性白細(xì)胞抗原G 試劑盒 Human soluble Human leucocyte antigen G1,sHLA-G ELISA KIT
人凝血酶原試劑盒  Human Prothrombin,PT ELISA KIT
人補(bǔ)體因子D 試劑盒 Human complement factor D,CFD ELISA KIT
人血漿纖維連接蛋白試劑盒  Human Plasma fibronectin,pFN ELISA KIT
人細(xì)胞纖維連接蛋白試劑盒  Human cellular fibronectin,cFn ELISA KIT
人總蛋白S 試劑盒 Human Total protein S,TPS ELISA KIT
人血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白試劑盒 Human serum deprivation response,SDPR ELISA KIT
人中性粒細(xì)胞防御素1-3 試劑盒 Human neutrophil peptide 1-3,HNP1-3 ELISA KIT
人嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白試劑盒 Human eosinophil cationic protein,ECP ELISA KIT
人血漿抗凝蛋白S 試劑盒  Human plasma anticoagulant protein S,PS ELISA KIT
人血漿抗凝蛋白C 試劑盒  Human plasma anticoagulant protein C,PC ELISA KIT
人免疫球蛋白G Fc片段試劑盒 Human Fc region of immunoglobulin G,Fcγ ELISA KIT
人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B 試劑盒  Human cyclophilin B,CyPB ELISA KIT